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第三节 抗原检测法
沙眼衣原体抗原检测方法包括免疫层析法、直接免疫荧光法。
一、免疫层析法
1.检测原理
标本中衣原体脂多糖抗原与胶体金或乳胶标记的衣原体单克隆抗体结合形成复合物,复合物通过毛细作用发生迁移,与固定有抗衣原体脂多糖的单克隆抗体结合显色。
2.检测准备
抗原检测试剂盒包括溶液A和溶液B,抗原检测试剂卡。
3.标本采集
该方法检测的适宜标本一般为宫颈标本和尿道标本,采集方法同实时荧光PCR法。
4.检测流程
(1)使用前请将试剂盒、标本放置于室温复温30分钟;
(2)标本管中加入数滴溶液A,将采样拭子放入含有A溶液的标本处理管中,不断旋转并在管壁挤压拭子,使液体挤出,重复多次处理数分钟;
(3)在标本管中继续滴加溶液B数滴不断旋转并在管壁挤压拭子,使液体挤出,重复多次,处理数分钟,丢弃拭子;
(4)抗原检测试剂卡标记标本编号,滴加标本提取物于试剂卡的检测窗,静置规定时间后,立即读取结果;
(5)结果判读:同时观察质控线(C)条带与检测线(T)条带,判断待检标本结果。C线处出现条带表明试验有效;无条带出现,说明试验无效,需重复试验。
5.结果报告
(1)阳性。
(2)阴性。
6.临床意义
临床标本沙眼衣原体抗原检测阳性可作为诊断生殖道沙眼衣原体感染的依据,但该方法的敏感性较低,阴性结果不排除患者感染沙眼衣原体。
7.注意事项
(1)溶液A和溶液B含有强腐蚀性液体,使用时注意安全,如有溅到皮肤或眼睛内,应立即使用大量清水冲洗。
(2)拭子质量可能对结果有影响,最好用涤纶拭子。
(3)质控线(C)条带显示试验有效,如果质控线没有出现条带,说明试验无效,需重复试验。
(4)检测线的显色速度及强度与标本中衣原体脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抗原量成正比,强阳性在数分钟内即可显色,弱阳性显色较慢且弱,应在规定的时间内判读结果。
二、直接免疫荧光法
1.检测原理荧光标记的抗沙眼衣原体单克隆抗体与标本中的沙眼衣原体结合,在荧光显微镜下可见绿色荧光的衣原体原体或包涵体。
2.检测准备
(1)仪器设备:荧光显微镜。
(2)检测试剂盒:包括荧光标记抗沙眼衣原体单克隆抗体、已知沙眼衣原体阳性和阴性对照片、磷酸盐缓冲液、碱性甘油封片剂。
3.标本采集 该方法检测的适宜标本为宫颈标本和尿道标本,标本采集同实时荧光PCR法,具体适宜标本参考各试剂说明书的要求。
4.检测流程
(1)标本片制备:将采集的拭子标本,均匀的涂布在玻片上,自然干燥后,滴加丙酮固定10分钟。
(2)标本、阴性和阳性对照片各滴加荧光标记抗沙眼衣原体抗体。
(3)放置于湿盒中,37℃孵育30分钟。
(4)磷酸盐缓冲液洗涤数次,每次10分钟,自然干燥。
(5)滴加碱性甘油后加盖玻片,荧光显微镜下观察结果。
(6)结果判读:参照阴性、阳性对照片结果,观察试验标本。40×10倍镜下发现10个及以上单一针尖样绿色荧光的颗粒,判为阳性;每片可见小于10个单一针尖样绿色荧光的颗粒,判为可疑;未发现典型发绿色荧光颗粒,仅可见复染红棕色的细胞则为阴性。
5.结果报告
(1)阳性。
(2)阴性。
6.临床意义 临床标本沙眼衣原体抗原检测阳性可作为诊断生殖道沙眼衣原体感染的依据,但该方法的敏感性较低,阴性结果不排除患者感染沙眼衣原体。
7.注意事项
(1)标本采集后立刻制备标本片,制备涂片时拭子轻轻滚动且要涂布均匀。
(2)使用的玻片应清洁,防止杂质引起的假阳性染色。
(3)涂片边缘的浓集染色可能是由于荧光试剂干涸引起,会导致假阳性结果。