中药化学成分程序化分离制备
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2.3 丹参

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。丹参的主要活性成分有水溶性的丹酚酸类化合物及脂溶性的丹参酮类化合物。现代药理研究表明,丹参脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用,其中主要活性成分包括丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮等。

【主要化学成分与结构】

【主要化学成分提取、分离】[4~6]

(1)分离方法一

图2-8 丹参粗提物的制备HSCCC分离图[4]

HSCCC条件:柱体积266mL;溶剂系统,石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶3∶4∶2)(a)、(8∶5∶8∶3)(b),
上相作为固定相,下相作为流动相,流速2mL/min,进样量80mg。1—丹参酮Ⅰ(14mg,99.0%);
2—二氢丹参酮Ⅰ(22mg,99.6%);3—丹参酮ⅡA(26mg,99.1%);4—二氢丹参酮
(11mg,96.3%);5—三叶鼠尾酮B(15mg,98.2%);6—隐丹参酮(30mg,99.2%)

图2-9 丹参粗提物的HPLC分析图[4]

HPLC条件:Symmetryshield C18(4.6mm×250mm,5μm),紫外检测波长270nm,
柱温25℃,流速1.0mL/min,进样量10μL;流动相,甲醇-水=75∶25。
1—丹参酮Ⅰ;2—二氢丹参酮Ⅰ;3—丹参酮ⅡA;4—二氢丹参酮;
5—三叶鼠尾酮B;6—隐丹参酮

(2)分离方法二

图2-10 丹参粗提物的制备HSCCC分离图[5]

HSCCC条件:柱体积260mL;溶剂系统,石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(6∶4∶6.5∶3.5),
上相作为固定相,下相作为流动相;流速2mL/min,进样量400mg,固定相保留率50%。
Ⅰ—二氢丹参酮Ⅰ(8.2mg,97.6%);Ⅱ—1,2,15,16-tetrahydrotanshiquinone
(5.8mg,95.1%);Ⅲ—隐丹参酮(26.3mg,99.0%);Ⅳ—丹参酮Ⅰ(16.2mg,99.1%);
Ⅴ—甘西鼠尾新酮A(25.6mg,93.2%);Ⅵ—丹参新酮(9.3mg,98.7%);
Ⅶ—丹参酮ⅡA(68.8mg,99.3%)

图2-11 丹参粗提物的HPLC分析图[5]

HPLC条件:SPHERIGEL ODS C18(4.6mm×250mm,5μm),紫外检测波长254nm,
柱温25℃,流速1.0mL/min,进样量10μL;流动相,甲醇-水=75∶25。Ⅰ—二氢丹参酮Ⅰ;
Ⅱ—1,2,15,16-tetrahydrotanshiquinone;Ⅲ—隐丹参酮;
Ⅳ—丹参酮Ⅰ;Ⅴ—甘西鼠尾新酮A;Ⅵ—丹参新酮;
Ⅶ—丹参酮ⅡA

(3)分离方法三

图2-12 丹参粗提物的制备HSCCC分离图[6]

HSCCC条件:柱体积325mL;溶剂系统,环己烷-乙醇-水[A,10∶5.5∶4.5(0~260min),
B,10∶7∶3(260~560min)],A系统的上相作为固定相,A、B系统的下相作为流动相;
流速2mL/min,进样量300mg,固定相保留率59%。1—二氢丹参酮Ⅰ(88.1%);2—未知化合物
(89.2%);3—隐丹参酮(98.8%);4—丹参酮Ⅰ(93.5%);5—未知化合物(95.1%);
6—亚甲基丹参醌(97.6%);7—丹参新醌乙(94.3%);8—丹参酮ⅡA(96.8%)

图2-13 丹参粗提物的HPLC分析图[6]

HPLC条件:reversed-phase Ultrasphere C18柱(4.6mm×250mm,5μm),紫外检测波长280nm,
柱温25℃,流速1.0mL/min,进样量10μL;流动相,A,0.075%三氟乙酸,B,乙腈,0~5min,
0% B;5~25min,0%~70% B;25~40min,70% B;40~41min,70%~0% B。
1—二氢丹参酮Ⅰ;2—未知化合物;3—隐丹参酮;4—丹参酮Ⅰ;5—未知化合物;
6—亚甲基丹参醌;7—丹参新醌乙;8—丹参酮ⅡA