中药化学成分程序化分离制备
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2.4 贯叶连翘

贯叶连翘为藤黄科金丝桃亚科植物贯叶连翘Hypericum perforatum L.的多年生草本植物,具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效。贯叶连翘的主要活性成分为蒽醌、黄酮等类化合物。药理研究表明,贯叶连翘蒽醌类成分具有收敛、抗菌作用,并能止血,其中主要活性成分包括贯叶金丝桃素、加贯叶金丝桃素、金丝桃素等。

【主要化学成分与结构】

【主要化学成分提取、分离】[7,8]

(1)分离方法一

图2-14 贯叶连翘疏水性粗提物的制备ASE-HPCCC分离图[7]

ASE-HPCCC条件:柱体积125mL,溶剂系统,乙酸乙酯-甲醇-水(4∶2∶5,体积比),
上相作为固定相,下相作为流动相;检测波长254nm,流速1.5mL/min。
(a)ASE-HPCCC(小进样量模式):1—贯叶金丝桃素(4.9mg,98.61%);
2—加贯叶金丝桃素(4.6mg,98.34%);(b)ASE-HPCCC(大进样量模式):
1—贯叶金丝桃素(28.4mg,97.28%);2—加贯叶金丝桃素(32.7mg,97.81%)

图2-15 贯叶连翘粗提物及分离后组分的HPLC分析图[7]

HPLC条件:色谱柱Agilent ODS C18(250mm×4.6mm,5μm);紫外检测波长254nm,
柱温25℃,流速1.2mL/min;流动相,(A)乙腈,(B)0.5%乙酸-水,0~60min,40%~80%A。
(a)ASE提取物;(b)贯叶金丝桃素;(c)加贯叶金丝桃素

(2)分离方法二

图2-16 贯叶连翘石油醚粗提物的制备HSCCC分离图[8]

HSCCC条件:柱体积220mL,溶剂系统,正庚烷-甲醇-水(1.5∶0.5∶0.1,体积比)
M点变为正庚烷-甲醇(1.5∶1,体积比)。上相作为固定相,下相作为流动相。
检测波长254nm,流速2.0mL/min、1.0mL/min。1—贯叶金丝桃素(>98%)。
(a)GS10A3;(b)GS20

图2-17

图2-17 贯叶连翘乙酸乙酯粗提物的制备HSCCC分离图[8]

HSCCC条件:柱体积220mL,溶剂系统,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶3∶1∶3,体积比)(Ⅰ);
(1∶1∶1∶1,体积比)(Ⅱ);首先以(Ⅰ)上相作为固定相,下相作为流动相,在M点变为(Ⅱ)
的下相作为流动相(a);先以(Ⅱ)上相为流动相,至M点换为(Ⅰ)的上相为流动相(b)。
流速:2.0mL/min、1.0mL/min。2—金丝桃素(95%)

图2-18 贯叶连翘石油醚粗提物及分离后组分的HPLC分析图[8]

HPLC条件:Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm,5μm);检测波长:275nm,320nm;
流速:1.0mL/min;流动相,(A)2%乙酸水溶液,(B)2%的乙酸于甲醇,0~5min,
90%~100%B,保持100%B 16min。(a)石油醚提取物的HPLC图;(b)(c)第一次及
第二次HSCCC分离得到的贯叶金丝桃素HPLC-DAD图

图2-19 贯叶连翘乙酸乙酯粗提物及分离后组分的HPLC图[8]

HPLC条件:Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm,5μm);检测波长590nm;流速1mL/min;
流动相:(A)2%乙酸水溶液,(B)2%的乙酸于四氢呋喃,0~10min,15%~100%B,
保持2min。(a)乙酸乙酯提取物的HPLC图;(b)金丝桃素标准品的HPLC图;
(c)第一次HSCCC分离得到的金丝桃素HPLC图;(d)第二次分离得到的
金丝桃素HPLC图。2—金丝桃素