学习活动2 培养基母液的配制

【学习目标】 1．理解配制培养基母液的原因。

2．能正确使用电子天平。

3．了解培养基主要成分母液的浓缩倍数。

4．能用容量瓶正确定容各种母液。

【学习准备】 电子天平、称量纸、玻璃瓶、玻璃棒、药匙、不同大小的容量瓶、配制培养基母液的各种物质、贮液瓶、冰箱、标签纸。

【学习过程】

问题1

通过学习培养基配方，我们知道按照培养基配方的要求分别称取各种物质配制培养基就可以了，为什么还要配制母液？

基本知识

一、培养基母液的配制原理

在植物组织培养中，配制培养基是经常性工作。若每次配制培养基时都按照配方中的成分用量进行称量，既费时间，又增加了多次称量的误差。为了提高效率，一般将常用的基本培养基中的各种成分按原量10~200倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫作母液。母液贮存在冰箱中。每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/200、1/1000，加以稀释混合，即成培养液。这样，配制一次母液可以使用多次，既可降低工作强度，又可提高试验精度。

二、培养基母液配制

现以MS培养基为例，说明培养液中各类物质母液制备的方法。

MS完全培养基的母液有5种：大量元素母液（浓缩20倍）、微量元素母液（浓缩200倍）、铁盐母液（浓缩200倍）、除蔗糖之外的有机物质母液（浓缩200倍）、生长调节物质母液。

（一）大量元素母液配制

1．大量元素母液倍数的确定与计算

大量元素母液配制时要分别称量、分别溶解，按照表3-2-1的顺序混合、定容，以防出现沉淀。在具体操作过程中，为了避免各种成分之间发生反应形成沉淀，一般将培养基成分中的KH2PO4、CaCl2·2H2O单独配制。一般大量元素配成20倍的母液，使用时再稀释20倍。配制好后倒入磨口试剂瓶中，贴好标签、作好记录，常温保存或放在冰箱中保存。

表3-2-1 MS培养基大量元素母液（配1 L 20倍的母液）

问题2

知道了培养基的配方，又明确了大量元素母液的浓缩倍数，计算得到了1L母液中所含的各种物质的质量。现在需要配制1L母液，那么如何操作呢？

操作实例

2．大量元素母液配制步骤

以配制1L大量元素母液Ⅰ为例。

图3-2-1大量元素母液配制流程图

（二）微量元素母液配制

微量元素母液一般浓缩200倍。在配制微量元素母液时，也是分别称量、分别溶解，混合时可以不按顺序随意加入容量瓶中，再定容，一般不会出现沉淀。配制好后倒入磨口试剂瓶中，贴好标签、作好记录，常温保存或放在冰箱中保存。

表3-2-2 MS培养基微量元素母液（配1 L 200倍的母液）

（三）有机物质母液

一般配制成200倍。按照表3-2-3的用量分别称取各种有机物，分别溶解后，倒入容量瓶，再用蒸馏水或超纯水定容于1L，最后倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。也可将肌醇单独配制。

表3-2-3 MS培养基有机物质母液（配1 L 200倍的母液）

（四）铁盐母液

铁盐不易被植物吸收利用，只有螯合物才容易被植物吸收利用，所以铁盐必须单独配制，同时避免与其他无机元素混合而形成沉淀。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，使用方便，不易产生沉淀。

配制方法：将5.56 g FeSO4·7H2O和7.46 g Na2-EDTA分别用450 mL蒸馏水溶解，适当加热并不断搅拌，溶解后，将硫酸亚铁溶液缓缓倒入乙二胺四乙酸二钠溶液中，最后定容到1000 mL，倒入棕色广口瓶中，贴上标签、作好记录，放在冰箱中备用。用时每配1000 mL培养基取5 mL。

表3-2-4 MS培养基铁盐母液（配1 L 200倍的母液）

（五）生长调节物质母液

生长调节物质的用量极少，通常使用的质量浓度单位是mg/mL。配制母液时，各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，母液一般配成0.5~1 mg/mL的质量浓度。

1．生长素

生长素一般要先用少量95%酒精或0.1 mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水或超纯水定容，倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。

2．细胞分裂素

细胞分裂素一般要先用0.5~1 mol/L盐酸或0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，然后加蒸馏水定容，倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。ZT先用少量95%酒精溶解，再用热蒸馏水定容。

3．赤霉素

赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，易分解，最好用少量95%酒精配成母液贮存于冰箱备用，使用时再用蒸馏水稀释到所需的浓度。

琼脂、蔗糖等用量大的物质，不需要配制母液，使用时直接称量，随取随用。