内分泌疾病的诊断包括功能诊断、定位诊断和病因/病理诊断三个方面。

内分泌功能的诊断是内分泌疾病诊断的第一步骤。详尽的病史采集、完整的体格检查及必要的实验室检查是内分泌疾病功能诊断的基础。

病史收集和体格检查是功能判断的第一步。典型症状和体征对诊断内分泌疾病有重要参考价值，而有些临床表现与内分泌疾病关系比较密切，应注意从非特异性临床表现中寻找内分泌功能紊乱和内分泌疾病的诊断线索。常见的内分泌疾病的综合征见本章第五节。

实验室检查是评定内分泌腺体功能的重要手段，包括血尿生化指标测定、激素及（或）其代谢产物测定、激素分泌动态功能试验等。

血尿生化指标测定的目的是收集内分泌代谢紊乱证据。机体在正常生理状态下，激素与血清电解质、糖、脂质、蛋白质等物质之间相互调节，保持动态平衡，如酸碱平衡、电解质平衡。测定血、尿中的生化指标，如血糖、血脂谱、血钠、钾、钙、磷、碳酸氢根等，可间接了解相关激素分泌的量，据此推论分泌该激素的内分泌腺的功能状态。

通过测定与激素释放同时产生的代谢产物量来推断该激素的分泌量。一分子的胰岛素释放伴有一分子的C肽生成，而且C肽的半衰期比胰岛素长，因此测定血中C肽水平可反映胰岛素水平。

通过兴奋或抑制靶腺产生内源性激素的试验，称为激素分泌动态试验。其主要包括兴奋试验和抑制试验，其他还有拮抗试验、负荷试验和耐受试验等。试验结果正常，反映整个内分泌轴的功能正常；异常则提供反应机制异常的线索。

兴奋试验多适用于腺体分泌功能减退的情况，可评估激素的贮备功能。应用促激素试验检测靶腺的反应，如胰岛素低血糖兴奋GH、ACTH试验，左旋多巴、精氨酸兴奋GH试验等。

抑制试验多适用于腺体分泌功能亢进的情况，用于观察调节轴的正常反馈调节是否消失，判断功能亢进是原发于靶腺还是继发于垂体，判断是否有功能性肿瘤存在等。如，地塞米松抑制试验有助于皮质醇增多症的鉴别；葡萄糖耐量试验既可作为激动试验（胰岛素、C肽）又可作为GH抑制试验。

进行兴奋或抑制试验时，必须排除可以作用于靶腺的药物的干扰，例如肾上腺皮质激素类药物可以抑制肾上腺皮质，当这种抑制达到一定程度时，对外源性ACTH的兴奋反应就消失了。

病理诊断包括病变性质和病变部位的确定。可通过影像学、放射性核素、超声及细胞学等检查手段发现微小病变。

影像学检查是确定腺体病变部位的重要手段，尤其是对于可以手术治疗的功能亢进的内分泌疾病。常用的影像学检查包括：CT、MRI、蝶鞍X线平片、分层摄影等，这些检查方法属于非侵袭性内分泌腺检测法，对内分泌腺和内分泌腺肿瘤的分辨率较高，可用于下丘脑-垂体疾病、肾上腺肿瘤、胰腺肿瘤、嗜铬细胞瘤的诊断。

放射性核素显像，如甲状腺扫描、肾上腺皮质扫描，既可确定内分泌腺的解剖形态，又能反映腺体或其局部的血液供应、代谢和功能状态。放射性核素用于激素水平的定量分析，其灵敏度和特异性远远超过其他生化和生物学方法。应用 ¹³¹I进行甲状腺扫描，可诊断甲状腺的功能性结节； ¹³¹I间碘苄胍扫描用于嗜铬细胞瘤的诊断。

B型超声检查是超声诊断的主要方法，检查得到的二维切面图有直观性，常用于甲状腺、肾上腺、胰腺、乳腺、性腺检查。

细胞学检查包括：免疫细胞化学技术、激素受体检测、细针穿刺细胞病理活检。多数内分泌疾病的评价不用此检查方法，仅偶尔用于对肿瘤的诊断。但是，甲状腺细针穿刺活检对慢性甲状腺炎的诊断可靠。

选择性静脉导管在特殊部位的选择性采样（血），测定激素含量，以确定腺体病变部位。例如，选择性岩下窦静脉插管取血检测ACTH，可以明确垂体ACTH瘤的定位；选择性肾静脉采样对诊断肾血管性高血压有益。

病因检查有助于了解内分泌疾病的性质。内分泌疾病按其病因可分为原发性和继发性两大类。由功能异常部位本身的病变引起的称原发性，如原发性醛固酮增多症、原发性甲状腺功能减退症；非功能异常部位的病变引起的称继发性，如由于垂体的功能异常引起靶腺功能异常的依赖性皮质醇增多症。随着试验技术发展，下列技术已应用于临床病因的检查。

细胞学和免疫组化技术用于垂体瘤、肾上腺肿瘤的手术标本，甲状腺细针穿刺吸取标本及手术标本，可进一步明确病变的良恶性以及分泌的激素种类，为进一步治疗方案提供依据。

某些内分泌疾病是由染色体畸变所引起，放射性受体分析法、重组DNA技术可用于受体遗传性缺陷的检测。

DNA杂交技术用于内分泌肿瘤手术标本癌基因检测。

自身抗体测定体内的激素水平是反映内分泌代谢功能状态的直接指标，各种自身免疫抗体，如甲状腺球蛋白抗体、促甲状腺激素受体抗体、胰岛素抗体、胰岛细胞抗体、抗肾上腺抗体等测定有助于明确内分泌疾病的性质以及自身免疫病的发病机制，甚至可作为早期诊断和长期随访的依据。