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第一节 蛋白质的分子组成
虽然蛋白质种类繁多,但元素组成基本相似,所有蛋白质分子都含有碳(50%~55%)、氢(6%~7%)、氧(19%~24%)、氮(13%~19%),大部分蛋白质含有硫(0%~4%)。有些蛋白质还含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼等。各种蛋白质的含氮量十分接近,平均约为16%。生物体内的含氮物质以蛋白质为主要形式,因此只要测出生物样品中含氮量,就能按以下公式计算出样品中蛋白质的大致含量。
每克样品含氮克数×6.25×100=100g样品中蛋白质含量(g%)
一、 氨基酸
氨基酸(amino acid)是蛋白质的基本组成单位。自然界存在300余种氨基酸,但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种,且均为L-α-氨基酸(甘氨酸除外)。
由图1-1可见,这20种氨基酸的共同特点是相邻羧基(—COOH)的α-碳原子结合有4种不同的基团或原子,分别是羧基、氨基(—NH 2)或亚氨基(=NH)、侧链(R)和氢原子(H),所以α-碳原子是不对称碳原子(甘氨酸除外)。不同的氨基酸只是侧链各异。
图1-1 L-α-氨基酸的结构通式
(一) 氨基酸的分类
组成蛋白质的20种氨基酸,根据其侧链的结构和理化性质可分成四类:①非极性氨基酸;②极性中性氨基酸;③酸性氨基酸;④碱性氨基酸(表1-1)。
表1-1 氨基酸分类
续表
非极性氨基酸的侧链为疏水性基团,水溶性小于极性中性氨基酸。极性中性氨基酸侧链上的巯基、羟基或酰胺基有亲水性。酸性氨基酸的侧链都含有羧基,在水溶液中能释出H +而带负电荷。碱性氨基酸侧链上有氨基、胍基或咪唑基,在水溶液中能结合H +而带正电荷。酸性氨基酸和碱性氨基酸的侧链亲水性强。含有苯基的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸统称为芳香族氨基酸。
20种氨基酸中脯氨酸属于亚氨基酸。在蛋白质合成加工时脯氨酸和赖氨酸可分别被修饰成羟脯氨酸、羟赖氨酸。半胱氨酸的巯基容易失去质子,在蛋白质中有时2个半胱氨酸的巯基通过脱氢以二硫键相结合,形成胱氨酸(图1-2)。
图1-2 胱氨酸与二硫键
(二) 氨基酸的理化性质
1. 两性解离及等电点
氨基酸的同一分子中既含有碱性的α-氨基,又含有酸性的α-羧基,在溶液中可分别解离形成带正电荷的阳离子( )和带负电荷的阴离子(—COO -),因此氨基酸是两性电解质。氨基酸的解离状态受溶液pH的影响,在某一pH溶液中,氨基酸解离所带的正负电荷数量相等,成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点(isoelectric point,pI)。此时,若向溶液中加酸,氨基酸解离为阳离子;若向溶液中加碱,氨基酸解离为阴离子。
2. 氨基酸的紫外吸收性质
芳香族氨基酸中的色氨酸、酪氨酸含有共轭双键,具有吸收紫外光的特性,最大吸收峰在280nm波长附近(图1-3)。由于大多数蛋白质含有色氨酸和酪氨酸残基,所以蛋白质溶液在280nm的紫外吸收值与蛋白质的浓度成正比。此特性可用于蛋白质的定量分析。
图1-3 芳香族氨基酸的紫外吸收
3. 氨基酸的茚三酮反应
氨基酸能与某些试剂发生特异的颜色反应。例如,氨基酸与茚三酮水合物共加热时,氨基酸被氧化脱氨,而茚三酮水合物被还原并与氨基酸分解出来的氨结合,然后该产物的氨基再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色的化合物,此化合物最大吸收峰在570nm波长处。该反应可用作为氨基酸的定量分析方法。
二、 肽
氨基酸通过肽键彼此连接起来的化合物称为肽(peptide)。肽键(peptide bond)是由一分子氨基酸的α-羧基与另一分子氨基酸的α-氨基脱水形成的共价键,属于酰胺键(图1-4)。氨基酸形成肽键连接之后,由于脱水而结构不完整,称为氨基酸残基。由2个氨基酸残基组成的肽称为二肽;由3个氨基酸残基组成的肽称为三肽,依此类推。通常把2~10个氨基酸相连而成的肽称为寡肽,11~50个氨基酸相连而成的肽称为多肽,50个氨基酸以上相连而成的肽称为蛋白质。多肽和蛋白质的链状结构称为多肽链(polypeptide chain),多肽链有两端,一端是游离的α-氨基称为氨基端或N端;另一端是游离的α-羧基称为羧基端或C端。
除蛋白质外,在生物体内还有一些具有生物活性的小分子肽类,属于寡肽或多肽,称为生物活性肽。生物活性肽在细胞间信息传递、神经传导、代谢调节等方面起着重要的作用。例如,下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素是三肽,腺垂体分泌的促肾上腺皮质激素是39肽,等等。下面重点介绍谷胱甘肽。
图1-4 肽与肽键
谷胱甘肽(glutathione,GSH;SH表示分子中的游离巯基)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸缩合成的三肽。GSH是一种不典型的三肽,其谷氨酸通过γ-羧基与半胱氨酸的α-氨基形成酰胺键(图1-5)。GSH分子中的巯基是主要官能团,具有还原性。GSH通过巯基参与细胞内的氧化还原作用,而保护蛋白质或酶的活性巯基不被氧化。例如,在谷胱甘肽过氧化物酶的催化下,GSH作为抗氧化剂可还原细胞内产生的H 2O 2,使其转变成H 2O。此反应生成的氧化型谷胱甘肽(GSSG)需重新转化为还原型的GSH,维持抗氧化作用(图1-6)。
图1-5 谷胱甘肽(GSH)
图1-6 GSH与GSSG间的相互转换
NADP +:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
三、 蛋白质的分类
蛋白质结构复杂、种类繁多,所以分类方法也有多种。
(一) 根据蛋白质组成成分分类
分为单纯蛋白质和结合蛋白质两大类。单纯蛋白质只含氨基酸。而结合蛋白质除蛋白质部分外,还含有非蛋白质部分,其非蛋白质部分称为辅基。按辅基不同,结合蛋白又可分为糖蛋白(含多糖)、脂蛋白(含脂类)、核蛋白(含核酸)、磷蛋白(含磷酸)、金属蛋白(含金属)和色蛋白(含色素)等。
(二) 根据蛋白质分子形状分类
分为球状蛋白质和纤维状蛋白质两大类。球状蛋白质的长轴与短轴相差不多,分子呈球状或椭球状。生物界多数蛋白质属球状蛋白质,一般为可溶性,如酶、转运蛋白、蛋白质类激素、代谢调节蛋白质、基因表达调控蛋白质和免疫球蛋白等。纤维状蛋白质的长轴一般比短轴长10倍以上。纤维状蛋白质多数为结构蛋白质,大多难溶于水,如结缔组织中的胶原蛋白和弹性蛋白、毛发中的角蛋白等。