中药化学成分程序化分离制备
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3.36 夏天无

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥块茎,具有活血止痛、舒筋活络、祛风除湿等功效。主要用于治疗中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛等,其中活性成分为生物碱类化合物,包括原阿片碱、苏元胡碱甲、比枯枯灵和四氢巴马亭等。

【主要化学成分与结构】

【主要化学成分提取、分离】[52,53]

(1)分离方法一

图3-101 夏天无生物碱的制备pH区带逆流色谱分离图[52]

pH-HSCCC条件:溶剂系统,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水,(a)5∶5∶1∶9,上相加10mmol/L三乙胺作为

固定相,下相加10mmol/L盐酸作为流动相;转速800r/min;固定相保留率43%;(b)5∶5∶2∶8,上相加

10mmol/L三乙胺作为固定相,下相加10mmol/L盐酸作为流动相,固定相保留率48%;(c)5∶5∶2∶8,

上相加5mmol/L三乙胺作为固定相,下相加5mmol/L盐酸作为流动相;固定相保留率41%;流速2mL/min;

检测波长254nm;进样量3.0g(用10mL加碱的上相和10mL未加酸下相,超声振荡溶解)。(c)方法

分离效果较理想,130~246min得原阿片碱(375mg,97.5%),288~347min得苏元胡碱甲(362mg,

95.6%),488~522min得比枯枯灵(246mg,97.1%);358~484min得比枯枯灵和四氢巴马亭的

混合物(850mg),再经HSCCC进行二次分离(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=1∶0.8∶1.1∶1)

分离纯化分别得到比枯枯灵(105mg,99.1%)、四氢巴马亭(470mg,99.7%)

图3-102 夏天无总生物碱的HPLC分析图[52]

HPLC条件:Waters C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长280nm;

柱温25℃;流速1mL/min;进样量10μL;流动相,乙腈-乙酸/乙酸钠

缓冲溶液=70∶30(pH 5.0)

(2)分离方法二

图3-103 夏天无生物碱的制备pH区带HSCCC分离图[53]

pH区带HSCCC条件:柱体积230mL;溶剂系统,甲基叔丁基醚-乙腈-水(2∶2∶3),(a)上相加5mmol/L

三乙胺作为固定相,下相加5mmol/L盐酸作为流动相;固定相保留率43%;进样量2.0g;(b)上相加

10mmol/L三乙胺作为固定相,下相加10mmol/L盐酸作为流动相;固定相保留率27%;进样量2.0g;

(c)上相加10mmol/L三乙胺作为固定相,下相加10mmol/L盐酸作为流动相;固定相保留率24%;

转速800r/min;进样量3.1g;流速2mL/min;检测波长254nm。Ⅰ—原阿片碱

(495mg,96.1%);Ⅱ—四氢巴马亭(626mg,93%);Ⅲ—比枯枯灵(423mg,96.9%)

图3-104 夏天无总生物碱的HPLC分析图[53]

HPLC条件:Shim-pack VP-ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长282nm;柱温25℃;

流速1mL/min;进样量10μL;流动相,乙腈-0.2mol/L乙酸/乙酸钠缓冲溶液(pH 5.0)=

70∶30。1—原阿片碱;2—四氢巴马亭;3—比枯枯灵