中药化学成分程序化分离制备
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3.17 黄连

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎,具有清热燥湿、泻火解毒等功效。黄连的主要活性成分为生物碱类化合物,具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用,主要活性成分包括巴马丁、小檗碱、表小檗碱、黄连碱、非洲防己碱、药根碱、木兰花碱、胆碱、groenlandicine、小檗红碱、氧化小檗碱、8-氧黄连碱等。

【主要化学成分与结构】

【主要化学成分提取、分离】[24~27]

(1)分离方法一

图3-43 黄连粗提物的制备HSCCC分离图[24]

HSCCC条件:溶剂系统,氯仿-甲醇-0.2mol/L HCl(4∶2∶2),上相作为固定相,下相作为流动相;

流速2.0mL/min;进样量300mg/12mL,固定相保留率76.7%。1—巴马丁(18mg,95%);2—小檗碱

(61mg,95%);3—表小檗碱(14mg,97%);4—黄连碱(21mg,91%);

5—非洲防己碱(10mg,85%);6—药根碱(6mg,86%)

图3-44 黄连粗提物的HPLC分析图[24]

HPLC条件:Hypersil ODS2柱(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长254nm;柱温30℃;

流速0.6mL/min;进样量20μL;流动相,乙腈-50mmol/L磷酸二氢钾水溶液

(pH=4.0,含15mmol/L十二烷基硫酸钠)=50∶50。1—巴马丁;2—小檗碱;

3—表小檗碱;4—黄连碱;6—药根碱;7—木兰花碱;8—阿魏酸

(2)分离方法二

图3-45 黄连粗提物的制备HSCCC分离图[25]

HSCCC条件:柱体积230mL,溶剂系统,氯仿-甲醇-0.2mol/L HCl

(4∶1.5∶2,体积比),上相作为固定相,下相作为流动相;

流速2mL/min;进样量200mg/10mL;固定相保留率73.3%。

1—未知物;2—巴马丁;3—小檗碱;4—表小檗碱;5—黄连碱

(3)分离方法三

图3-46

图3-46 黄连粗提物的制备HSCCC色谱图[26]

HSCCC条件:柱体积220mL,溶剂系统,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶5∶2∶5),上相作为固定相,

下相作为流动相;流速2mL/min(0~2.5h),5mL/min(2.5~5h);进样量20mg;固定相保留率66.3%。

1—巴马丁(4.7mg,98.5%);2—小檗碱(7.1mg,94.1%);3—worenine(0.8mg,

90.4%);4—表小檗碱(1.5mg,95.5%);5—黄连碱(1.9mg,88.4%);

6—药根碱(0.6mg,91.1%)

图3-47 黄连粗提物的HPLC分析图[26]

HPLC条件:紫外检测波长210nm,254nm,280nm,320nm,450nm;柱温30℃;流速1.5mL/min;

进样量20μL;流动相,A(甲醇-水-三氟乙酸=10∶89.9∶0.1),B(甲醇-水-三氟乙酸=

89.9∶10∶0.1),0~20min,5%~15% B;20~30min,15%~25% B;30~60min,25%~30% B。

1—worenine;2—巴马丁;3—小檗碱;

4—表小檗碱;5—黄连碱;6—药根碱

(4)分离方法四

图3-48 黄连粗提物的pH区带逆流色谱分离图[27]

pH-区带逆流色谱条件:溶剂系统,氯仿-甲醇-水(4∶3∶3),上相加60mmol/L盐酸,

下相加5mmol/L三乙胺;转速850r/min;流速2mL/min;进样量1.0g;检测波长254nm。

A—非洲防己碱;B—药根碱;C—黄连碱;D—巴马丁;E—小檗碱

图3-49 黄连粗提物的HPLC分析图[27]

HPLC条件:流动相,乙腈-0.1%三乙胺和2%冰醋酸水溶液

(35∶65);流速0.7mL/min;检测波长345nm;进样量10μL。

1—非洲防己碱;2—药根碱;3—黄连碱;

4—巴马丁;5—小檗碱