第二节 消毒与灭菌方法

食用菌的消毒与灭菌是食用菌生产过程中的关键环节，一旦该环节出了问题，整个生产都会受到严重影响。下面就有关消毒与灭菌方面的知识做介绍。

一、消毒

消毒是利用物理或化学的方法杀死环境中或物体表面绝大部分微生物的一种方法。消毒对它所抑制的微生物具有暂时性、不彻底性和随机性。消毒在食用菌制种工作中应用很广，如在各级菌种制备之前需要对皮肤、器皿、工具、菌袋（瓶）等消毒；在菌袋（瓶）灭好菌后往接种室（箱）摆放前，要提前对这些场所进行消毒；在大棚（菇房）内种植食用菌之前，需要对大棚（菇房）内进行熏蒸消毒。

（一）常用消毒药品

1.表面擦拭消毒药品

酒精（75%）、高锰酸钾（0.1%～0.2%）、碘伏（1%～2%）、新洁尔灭（0.25%）。

2.空间熏蒸消毒药品

甲醛+高锰酸钾（10mL+5g/m3）、二氯异氰尿酸钠（5g/m3）、菇保一号（5g/m3）、二氧化氯（30mL+1片固体药片/m3）、荆防败毒散（10g/m3）。

3.空间喷雾消毒药品

苯酚（5%）、来苏尔（1%～2%）、新洁尔灭（0.25%～ 0.5%）、过氧化氢（2%～4%）二氧化氯（1000～3000mg/kg，目前使用较广的消毒剂，高效、低残留）。

4.表面撒施消毒药品

生石灰、大粒盐（将大粒盐溶于水后喷洒即可）。

5.基质内部消毒药品

克霉灵（0.1%）、百菌清（0.1%）、多菌灵（0.1%）、甲基托布津（0.1%～0.2%）。

以上消毒药品应定期轮换或几种消毒药品同时使用，而且要根据每一阶段的消毒效果对药剂的用量酌情使用，以防杂菌产生抗药性。

（二）常用消毒方法

1.化学药品消毒

使用上述消毒药品时应根据消毒的方式、类型而选用相应的化学药品。但值得一提的是，上述消毒药品中有一部分在对外出口贸易中为限制用药，一定要根据出口标准少用或不用。

2.物理方法消毒

（1）巴氏消毒法　将含有营养液的水拌入培养料中，之后建堆、发酵，通过料内嗜热微生物的大量增殖释放生物热，使料温达到60℃以上后维持数小时而起到杀菌作用的一种方法。

（2）紫外线消毒法　利用紫外线灯管在1.5m范围内照射30min，之后暗光0.5h后可达到消毒效果的一种方法。

（3）臭氧消毒法　利用臭氧发生器等仪器，按照其使用方法开机30～40min，维持环境中臭氧浓度在0.01mg/m3范围内，即可起到空间杀菌的效果的一种方法。

二、灭菌

灭菌是利用物理或化学的方法杀死环境中或物体表面一切微生物的一种方法。灭菌对它所抑制的微生物具有彻底性和相对稳定性。灭菌在食用菌制种工作中具有核心的地位，如在各级菌种制备中需要对试管培养基、罐头瓶培养基和塑料袋培养基等灭菌；在接种工具使用前也必须进行灭菌。如果灭菌环节出现问题，那么生产就意味着出现了严重的问题甚至导致企业停产。由此可见灭菌在食用菌生产环节中有着举足轻重的地位。

（一）常用灭菌方法

1.火焰灭菌法

常用酒精灯或火焰枪外焰对接种工具进行烧灼灭菌的一种方法。该法可杀死工具表面的所有微生物。

2.干热灭菌法

使用电热烘箱产生的高温对玻璃器皿、金属制品和陶瓷器皿等进行灭菌的一种方法。但该法不适合塑料制品和棉塞、纸张等的灭菌。

3.湿热灭菌法

通过常压或高压灭菌产生的高温蒸汽对被灭菌物品灭菌的一种方法。该法广泛应用于食用菌各级菌种培养基制作中。如对母种PDA培养基高压灭菌的条件为121～123℃、0.12MPa、30～40min；如对原种棉籽壳、木屑等培养基高压灭菌的温度为121～123℃、0.12MPa、1.5～2h；常压灭菌的温度为100℃，8h以上。

4.微波灭菌法

通过微波炉等设备产生的高频电磁波在极短的时间内使细胞死亡，从而达到无菌的一种方法。

（二）灭菌效果检验方法

1.母种培养基检验法

在已灭菌的母种培养基中随机抽取若干支试管，将其放置于25℃左右的恒温培养箱内培养3～5天，若无杂菌出现，则灭菌效果良好；若有奶油状、水浸状绿色、黄色或其他杂色菌落出现，则可能灭菌效果不好，该批母种培养基应弃用。另外特别留意母种试管口处棉塞在灭菌过程中是否受潮，是否在培养过程中出现霉菌，若发现该现象，则不论培养基面上有无污染都不用或慎用。

2.原种、栽培种培养基检验法

若首次使用新灭菌设备，或更换生产场地或更换生产工艺和配方等，则需要对原种、栽培种培养基进行检验。在已灭菌的原种或栽培种培养基中随机抽取若干袋（瓶）空白培养基，将其放置于25℃左右的恒温培养箱内培养5～7天，若无杂菌出现，则灭菌效果良好；若有杂色菌落出现，则可能灭菌效果不好。

3.液体培养基检验法

在无菌环境下，用灭过菌的接种环蘸取灭完菌的培养液，用划线法将其接种于平板培养基上，之后将平板放置于25℃左右的恒温培养箱内培养3天左右，若无杂菌出现，则灭菌效果良好；若有杂色菌落或细菌、酵母菌等出现，则可能灭菌效果不好。