五、细菌学检查

肺结核诊断的“金标准”是痰中找到结核菌，这是确诊主要依据。痰菌阴性活动性肺结核是连续3次痰片检查或痰菌培养检查未获得阳性结果，经非细菌学手段诊断为活动性肺结核者。

（一）结核菌的涂片检查

1．痰涂片抗酸染色法

包括直接涂片法、离心集菌涂片法、漂浮集菌涂片法等经萋尔-尼尔逊（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法后连续观察300个视野未发现抗酸杆菌的涂片，报告涂片阴性。检查结果抗酸杆菌报告标准如下。

抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌；

报告抗酸杆菌菌数：1～8条/300视野；

抗酸杆菌阳性（+）:3～9条/100视野；

抗酸杆菌阳性（++）:1～9条/10视野；

抗酸杆菌阳性（+++）:1～9条/每视野；

抗酸杆菌阳性（++++）:≥10条/每视野。

如果3张涂片中只1张涂片为1～8条/300个视野，总结果报阴性，其中2张涂片为1～8条/300个视野，总结果报阳性。

2．痰涂片荧光染色法

是将痰直接涂片或集菌后涂片，经荧光染色，用荧光显微镜在低倍物镜下连续观察50个视野，未发现抗酸杆菌的涂片，报告涂片阴性。检查结果抗酸杆菌报告标准如下。

荧光染色抗酸杆菌阴性（-）：镜检50个视野内未发现抗酸杆菌者。

荧光染色抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌数）:1～9条/50视野。

荧光染色抗酸杆菌（+）:10～99条/50视野。

荧光染色抗酸杆菌（++）:1～9条/每视野。

荧光染色抗酸杆菌（+++）:10～99条/每视野。

荧光染色抗酸杆菌（++++）:≥100条/每视野。

（二）结核菌的培养检查

1．改良罗氏（L-T）培养法

通用的培养方法，结核菌生长缓慢，生长周期在4～6周，至第8周末生长，方可报告培养阴影。培养检查结果报告标准如下。

（-）：培养8周未见菌落生长者。

（+）：培养基斜面菌落分散生长，占据斜面面积的1/4以下者。

（++）：培养基斜面菌落分散生长，占据斜面面积的1/2以下者。

（+++）：培养基斜面菌落密集生长或部分融合，占据斜面面积的3/4以下者。

（++++）：培养基斜面菌落密集生长呈苔样分布，占据斜面全部。

2．快速培养法

（1）半自动放射法或半自动BACTEC460快速培养法。可进行分离培养、药敏试验、菌种鉴定，但存在污染率高、放射性污染等不足。

（2）全自动非放射法。包括：①BACTEMGIT960系统，快速、高效、无污染、非放射性。②BACTEC9000系统，快速、准确、假阳性率低、无交叉污染，但有放射性。③DIFCO ESP系统，是取代BACTEC460作分离培养的可靠方法。④MB/BACT系统，快速、敏感，但污染率高，有放射性。

（三）L型结核菌检查

结核菌在环境、物理、化学、药物与免疫等多种因素影响下，使细胞壁发生部分或全部缺失后，结核菌变异为结核菌L型或L型结核菌。它的结构、形态、染色性、培养特性、致病性、免疫性、对药物的敏感性等生化特性均发生改变，尤其是抗酸染色性减弱或消失，使涂片抗酸染色镜检不能发现，菌体的渗透压升高，用培养结核菌的等渗培养基培养不生长，必须高渗培养基培养才生长，才能发现。

L型结核菌的检查发现，主要依靠培养方法，必须用高渗的特殊培养基培养，高渗培养基中常用者有：胰胨大豆蛋白胨培养基（TSA-L）、改良TSA-L培养基、matman合成培养基和PPLO培养基。