学习活动3 植物组织培养实训室的器皿、工具及其使用

【学习目标】 1．认识植物组织培养实训室常用的器皿及工具。

2．能正确清洗各种器皿。

3．能正确使用各种常用的工具。

【学习准备】 玻璃器皿：试管、三角瓶、组织培养瓶、培养皿、贮液瓶、烧杯、量杯、量筒、容量瓶、称量瓶、试剂瓶、滴管、移液管、玻璃棒、酒精灯。

工具：镊子、手术剪、解剖刀、接种针、接种钩、接种铲、试管架、洗耳球、搪瓷盘、药匙、医用小平车、育苗盘、育苗钵。

【学习过程】

问题1

植物组织培养实训室常用的器皿及工具有哪些？

基本知识

一、常用玻璃器皿的种类及规格

1．试管：常用规格有2 cm×15 cm、2.5 cm×15 cm、3 cm×15 cm。

2．三角瓶：口径多为2.5~3 cm；容积为50、100、150、250 mL不等。

3．组织培养瓶：用于试管苗的快繁，成本低，空间大，气体条件好，操作方便。常用200~500 mL的规格。

图2-3-1组织培养玻璃器皿

4．培养皿：用于单细胞的固体平板培养、胚和花药培养、室内催芽等。

5．注射器：该注射器头上装有滤板夹，可过滤消毒，亦可用于微量悬滴培养中营养液的分装。

6．刻度移液管：专管专用，常用的移液管容量有0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、1.5、2、2.5、5、10 mL等规格。

7．其他：各种容量的烧杯、量杯、量筒、试剂瓶、容量瓶、称量瓶、滴管、玻璃棒等。

二、工具

1．镊子：小型尖头镊子，适用于夹取植物组织和分离茎尖、叶片表皮等。长20~30 cm的枪形镊子，腰部弯曲，可用于接种和转移植物材料。

2．剪刀：常用的剪刀有解剖剪和弯头剪，一般在转移植株时使用。

3．解剖刀及刀片：常用的解剖刀有长柄和短柄两种，刀片有单面和双面之分。

4．接种工具：有接种针、接种钩、接种铲等，由白金丝或镍丝制成。

5．打孔器：取肉质茎、块茎、肉质根内部组织时使用。

6．其他：酒精灯、电磁炉、普通电炉、贮备蒸馏水的大型塑料桶、试管架、封口纸、皮套、脱脂棉、滤纸、药匙、温度计、湿度计、照度计、搪瓷盘、育苗盘、医用小平车等。

图2-3-2组织培养工具

图2-3-3电磁炉

问题2

植物组织培养实训室器皿、工具的使用及无菌操作应遵循哪些规程？

基本操作

三、玻璃器皿洗涤

植物组织培养中对玻璃器皿的清洁程度要求较高。

新购置的玻璃器皿或多或少地含有游离的碱性物质，试用前先用1%稀盐酸浸泡12 h，再用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一遍，晾干备用。

用过的玻璃器皿，先除去器皿中的残渣，用清水洗净，再用温肥皂水或洗衣粉水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一遍，晾干备用。

已污染的玻璃器皿，必须高压蒸汽灭菌后（高压灭菌锅温度121℃，灭菌时间30 min），倒掉残渣，用清水冲洗，并用毛刷刷去瓶壁上的培养液和菌斑，再用清水冲洗干净，浸泡于浓重铬酸钾中2h后取出，用自来水冲洗3~4次，最后用蒸馏水冲洗一遍，晾干备用。

清洗后的玻璃器皿，瓶壁应透明发亮，内外壁水膜应均一，不挂水珠。

对有顽固污垢的玻璃器皿，用超声波清洗，十分有效，对环境无污染。

四、灭菌方法

1．干热灭菌法：用于玻璃器皿或金属器具等耐热器具的灭菌。可以利用烘箱进行干热灭菌，烘箱温度150℃~180℃，保温时间2~3 h；灭菌后待烘箱充分冷却后打开烘箱门，以免外部冷空气进入烘箱，引起污染，或造成玻璃器皿的爆炸。

2．高压蒸汽灭菌法：用于玻璃器皿、器具和培养基的灭菌。新配制好的培养基分装后应立即灭菌，主要用此方法。控制高压灭菌锅内压力为1.1 kg/cm2，温度为121℃，保持20~25 min。

3．过滤除菌法：用于高温下容易分解或变性的物质，如生长调节物质、酶、某些维生素等不耐高温物质的灭菌。此法比较麻烦，不常用。

4．灼烧灭菌法：用于接种工具的灭菌。将接种工具直接在酒精灯的火焰上灼烧以杀死病菌，一般接种前先将接种工具用95%酒精浸泡，然后在火焰上灼烧，冷却后使用；或用组织培养器械专用灭菌器进行灭菌。

5．熏蒸灭菌法：接种室常用此方法灭菌，用甲醛与高锰酸钾产生的气体熏蒸，可杀死室内的病菌。接种室应定期熏蒸，效果好。

6．紫外线照射灭菌法：接种室和超净工作台接种前打开紫外线灯照射20~40 min。接种时要关闭紫外线灯，以免对人体造成伤害。

五、无菌操作

植物组织培养过程中，把用于离体培养的植物材料转入培养基的过程称为接种。在接种过程中，严格遵守无菌操作的要求是十分重要的。无菌操作可按照以下步骤进行：

1．实验前30 min打开接种室和超净工作台的紫外线灯，工作时关闭。

2．打开超净工作台风机20 min后，方可开始工作。

3．接种人员洗净双手，在缓冲室换好工作服，戴上口罩、帽子，并换上拖鞋等。

4．用酒精棉（70%酒精浸泡）擦拭工作台面。

5．手和小臂用70%酒精擦拭，特别是指甲处要认真擦拭。

6．培养瓶的瓶口在酒精灯上灼烧灭菌。

7．镊子、解剖刀等用具浸泡在90%或95%酒精中，后在酒精灯上灼烧灭菌，或用组织培养器械专用灭菌器灭菌，放支架上待用。接种过程中反复浸泡、灼烧。

8．接种时，工作人员双手不能离开工作台，不能说话、走动、咳嗽等。

9．接种完成后，清理干净工作台，可用紫外线灯照射30 min，若连续接种，每5天要高强度灭菌1次。

【思考题】

1．简要说明植物组织培养实训室的构成和用途。

2．简要说明接种室的主要设备、工具及其用途。

3．植物组织培养实训室设计应遵循哪些原则？

4．植物组织培养常用的灭菌方法有哪些？

5．植物组织培养的无菌操作规程有哪些？