学习活动2 外植体培养基的设计与制备

【学习目标】 1．能根据培养材料搜集信息。

2．能设计外植体培养基配方。

3．能熟练配制培养基。

【学习准备】 网络资源、培养基母液、天平、量筒、移液管、有刻度的钢精锅、高压锅、培养瓶、电磁炉、蒸馏水、pH试纸或酸度计、0.1N的NaOH、0.1N的HCl、蔗糖、琼脂。

【学习过程】

问题

你通过媒体或科技杂志查阅到北海道黄杨组织培养的培养基了吗？有什么特点？

获取信息

据报道，北京林业大学李云等研究北海道黄杨组织培养带芽茎段的启动培养基为MS+6-BA 2 mg/L+NAA 1 mg/L，分化继代培养基为MS+6-BA 4 mg/L+NAA 1 mg/L；

东北林业大学刘晓东等研究北海道黄杨组织培养带芽茎段的启动培养基为MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L，分化继代培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L。

上述报道中研究都采用MS培养基为基本培养基，且外植体培养获得成功。但除了基本培养基相同外，添加的生长调节物质有较大的差异，这种差异可能源于生长调节物质来自不同的生产厂家，或外植体取材方面，或外植体培养条件等方面。因此必须对培养基进行必要的设计试验。

一、外植体培养基配方设计

以北海道黄杨为例，北海道黄杨整个培养过程都选用MS基本培养基，再加入适量的生长调节物质。外植体培养所加的植物激素，只设计细胞分裂素（6-BA）一种。以不加6-BA为对照，浓度分别设计为0.2、0.4、0.5、0.8、1、1.5、2 mg/L，每个配方各20瓶培养基。

二、外植体培养基制备

以北海道黄杨为例，以MS培养基为基本培养基，每个不同6-BA浓度的培养基配方各做1 L培养基，每个配方各分装20瓶培养基，并按配方在瓶壁上进行标记，用高压锅正常灭菌后备用。

三、培养效果分析

试验结果显示，6-BA的浓度对外植体的萌发有明显的影响，在无6-BA的培养基上，北海道黄杨外植体不萌发，随着6-BA浓度的增高，芽丛数量及苗高逐渐增加，但超过一定量又表现为下降趋势，因此，适合北海道黄杨外植体的培养基配方为：MS+6-BA 0.5~0.8 mg/L。