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二、 淋巴管免疫组织化学显示法
20世纪80年代后期开始,人们用免疫组织化学技术,进行淋巴管的标记,来研究器官淋巴管的分布。Kaplar等(1983)首先用单克隆抗体(B27)做免疫反应研究不同部位血管内皮形态和功能上的特点。1990年Ezaki等为了客观准确地区分淋巴管和血管,采用双免疫技术研究了大鼠的小肠、膈和皮肤的淋巴管。我们也采用免疫组织化学方法研究了兔和大鼠的起始淋巴管的分布。B27标记的内皮细胞呈红色,而抗基膜抗体Ⅳ型胶原蛋白(type Ⅳcollagen)标记的基膜呈现蓝色。由于毛细淋巴管壁缺少基膜,所以仅呈红色,而毛细血管则呈深蓝色(其内皮细胞呈淡红色),毛细淋巴管和毛细血管的区分也是很明显的(图1-2)。
此外,国外学者相继发现血管内皮生长因子受体3、Podoplanin、Prox-1、淋巴管内皮透明质酸受体1等为淋巴管较特异、敏感的标记分子。近年来,张雅芳等(2007—2011)在淋巴管的定性和定位研究中,应用上述的淋巴管标记物标记了各种癌瘤组织的淋巴管(图1-3)。
图1-2 家兔小肠黏膜层淋巴管(免疫组织化学染色× 650,引自Ezaki,1990)
L.乳糜管;BC.毛细血管
图1-3 人恶性黑色素瘤组织淋巴管(免疫组织化学染色× 200)
箭头示LYVE-1阳性的淋巴管