中药化学成分程序化分离制备
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3.10 钩吻

钩吻为马钱科植物葫蔓藤Gelsemium elegans Benth.的全草,具有攻毒拔毒、散瘀止痛、杀虫止痒等功效。钩吻吲哚类生物碱是钩吻的主要活性成分,钩吻总生物碱具有显著的镇静、镇痛、抗肿瘤、促进造血、抑制血小板聚集和免疫调节等作用,其中主要的活性成分包括19-oxo-gelsenicine、钩吻素己、钩吻素子、11-甲氧基钩吻内酰胺、钩吻素甲、胡蔓藤碱乙等。

【主要化学成分与结构】

【主要化学成分提取、分离】[12~14]

(1)分离方法一

图3-23 钩吻粗提物的pH区带逆流色谱图[12]

pH区带逆流色谱条件:柱体积350mL;溶剂系统,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水

(3∶7∶1∶9,体积比),上相加10mmol/L三乙胺,下相加10mmol/L盐酸,上相作为

固定相,下相作为流动相;流速1.5mL/min;进样量4.5g。1—19-oxo-gelsenicine

(420mg,95.8%);2—钩吻素甲(456mg,95.1%);3—钩吻素子(723mg,

96.0%);4—11-甲氧基钩吻内酰胺(379mg,96.2%);5—钩吻素己

(342mg,95.5%);6—葫蔓藤碱乙(318mg,97.2%)

图3-24 钩吻粗提物和分离后组分的HPLC分析图[12]

HPLC条件:Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长254nm;柱温30℃;

流速1.0mL/min;流动相,乙腈-水(含0.1%乙酸);梯度洗脱,0~60min,乙腈体积比由10%

线性变为70%。1—19-oxo-gelsenicine;2—钩吻素甲;

3—钩吻素子;4—11-甲氧基钩吻内酰胺;

5—钩吻素己;6—葫蔓藤碱乙

(2)分离方法二

图3-25a 钩吻粗提物的制备HSCCC分离图[13]

HSCCC条件:溶剂系统,正己烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水(3∶3∶2∶3,体积比);

上相作为固定相,下相作为流动相;流速1.5mL/min;进样量300mg;固定相保留率71.3%

图3-25b Ⅰ和Ⅱ的制备HSCCC分离图[13]

HSCCC条件:溶剂系统,氯仿-甲醇-0.2mol/L HCl(4∶3∶1.5,体积比),

上相作为固定相,下相作为流动相;流速1.5mL/min;固定相保留率66%。

Ⅰ为目标组分钩吻素甲(30.78mg,97.76%)

图3-26 钩吻分离后组分的HPLC分析图[13]

HPLC条件:Hypersil ODS2(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长

256nm;柱温25℃;流速1.0mL/min;流动相,甲醇-0.2%正丁胺水

溶液=(50∶50)。1—钩吻素甲

(3)分离方法三

图3-27 钩吻粗提物的制备HSCCC分离图[14]

HSCCC条件:溶剂系统,氯仿-甲醇-0.1mol/L HCl(4∶4∶2,

体积比),上相作为固定相,下相作为流动相;流速1.5mL/min;

进样量300mg。钩吻素子(75mg,99.2%)

图3-28 钩吻粗提物分离后组分钩吻素子的HPLC分析图[14]

HPLC条件:Hypersil ODS2(4.6mm×250mm,5μm);

紫外检测波长256nm;柱温30℃;流速1.0mL/min;流动相,

乙腈-0.2%正丁胺=(60∶40)