4.5 及早发现和清除污染

组织培养中的污染可以由三种原因造成：一是由灭菌不彻底的外植体带入；二是接种时由周围空气或接种工具带入；三是接种后由封口膜边缘生长进入培养瓶内。外植体接种后要勤于观察，接种后7天内是发现污染的关键时期。污染可因细菌或真菌引起。细菌污染主要是在外植体周围形成菌斑，只要培养基没有积水，细菌污染扩展较慢，挖去污染的部分即可保护未受污染的材料。真菌污染一般3天左右可以见到最初征兆，借着反射光可见到刚刚生长的少量菌丝，这时挖去受污染的部分和延伸的菌丝可以挽救瓶内其余的材料。但真菌污染扩展很快，特别是形成孢子以后整个培养瓶的材料无可挽救。通常微生物污染3～7天内可以见到，不过半月甚至1～2月以后还可以发现少量污染。这可能是由侵入器官或组织内部的微生物所致，也可能是由培养瓶口附近残留的微生物孢子得到适合温度、湿度和培养基中的养分后萌发的菌丝向下生长进入培养基造成的。