4.2 植物材料的消毒灭菌

4.2.1 消毒杀菌剂的配制

植物材料消毒灭菌的要求是应该把附着于材料表面的微生物杀死，同时又尽量不伤害植物材料中的活细胞。常用的消毒剂有乙醇、次氯酸盐、升汞（HgCl2）等。70%～75%（V/V）乙醇的杀菌力和穿透力强，但处理时间要短，控制在30～60s以内，否则容易杀死植物细胞。次氯酸盐杀菌剂常用的有漂白粉，即次氯酸钙[Ca（ClO）2]，使用20%（m/V）澄清水溶液；也可用次氯酸钠（NaClO）水溶液。一般市售商品漂白剂含5.25% NaClO，加水稀释至10倍（约0.5%）用作消毒液。0.1%（m/V）HgCl2消毒液杀菌力比NaClO强，但附着在植物材料上的汞离子不易洗脱，消毒后的植物材料必须用无菌水多洗几次。HgCl2有剧毒，消毒后的废液容易污染环境，若非必须应尽量少用。

有些植物器官表面有浓密的表皮毛，或者表面有脂类物质或蜡质，那就要在水溶性消毒液中加几滴洗涤剂，减少表面张力，以利于浸湿带有表皮毛、脂类物质或蜡质的植物材料的表面。

4.2.2 植物材料消毒

向装有洗净的植物材料的烧杯内倒入70%～75%乙醇，浸没材料不超过1min，倾去乙醇，换上NaClO水溶液消毒（在此过程中将植物材料连同消毒液转移至无菌烧杯中并放进超净工作台内）15～20min后，倾去消毒液，用无菌水洗3次，每次2min。对于污染严重的植物材料，可选用0.1% HgCl2消毒，也可连续两次使用NaClO消毒，或一次NaClO消毒后再用HgCl2消毒（可灵活掌握，适当缩短灭菌时间）。注意防止消毒过度损伤植物组织；用HgCl2消毒后，需经无菌水洗涤5次。

使用消毒液的种类和处理的时间因植物种类、器官类型和生长状况而异。对于有保护结构的植物材料，如带有鳞片的芽、覆盖着花冠的雄蕊和雌蕊、干燥种子，可适当延长处理时间；桉树种子对HgCl2敏感，极易大幅度降低萌发率，应降低其使用浓度至0.05%或改用NaClO水溶液消毒。